干細胞療法正被探索用于治療各種疾病，包括血液病、免疫病、神經(jīng)退行性疾病和組織損傷。另外，干細胞衍生的外泌體可能提供類似的臨床益處，而沒有與活細胞移植有關(guān)的生物安全問題。然而，大規(guī)模的制造和純化，批次與批次之間的差異，以及對外泌體復雜載體的分析，將需要得到解決，以實現(xiàn)其臨床轉(zhuǎn)化。

干細胞，包括胚胎干（ES）細胞、誘導多能干（iPS）細胞和成人干細胞，具有自我更新和產(chǎn)生分化細胞的能力。它們分化成不同組織細胞的潛力使它們在再生醫(yī)學中的應(yīng)用特別有趣–例如，ES細胞衍生的心肌細胞移植對心肌再生很有希望。

然而，自從1957年開發(fā)出第一個使用干細胞的療法以來，只有少數(shù)基于干細胞的療法進入了臨床。根據(jù)美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)的數(shù)據(jù)，已有數(shù)千項干細胞治療相關(guān)的臨床試驗被注冊。

目前，美國食品和藥物管理局（FDA）批準的唯一干細胞療法是造血干細胞移植，用于影響造血系統(tǒng)的疾病患者的造血和免疫學重建。此外，少數(shù)源自間間充質(zhì)干細胞或組織特異性干細胞的干細胞產(chǎn)品已被批準用于臨床，如加拿大批準用于治療急性移植物抗宿主疾病的Prochymal，以及歐洲批準用于修復受傷角膜的Holoclar1。缺乏臨床轉(zhuǎn)化可能是由于干細胞療法存在一些不可避免的缺點。干細胞的大直徑可能會導致它們在靜脈注射后積聚在肺部，從而產(chǎn)生輸液毒性。此外，異體干細胞攜帶抗原，可能會引起免疫反應(yīng)。

此外，干細胞注射可能會導致腫瘤并發(fā)癥，包括血液學和非血液學惡性腫瘤（分別為畸胎瘤和非畸胎瘤）。 一些觀察到的干細胞的有益作用可能部分是由于其旁分泌作用，而不是移植的干細胞的長期移植。

干細胞來源的外泌體

干細胞，就像人體中的所有其他細胞一樣，釋放外泌體以相互交流。外泌體是膜結(jié)合的囊泡，直徑約為40-160nm，通過內(nèi)體途徑從細胞中釋放出來。外泌體以核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和代謝物形式存在的多種成分，不僅反映了它們的細胞來源，而且賦予它們潛在的治療功能，類似于它們的供體細胞，可用于無細胞療法。因此，臨床前探索了干細胞衍生的外泌體的治療應(yīng)用。

至少有150項臨床試驗已在ClinicalTrials.gov上注冊，研究各種疾病的基于外泌體的療法，包括呼吸系統(tǒng)疾病、傳染病和癌癥（在 www.clinicaltrials.gov 上使用“外泌體療法”作為關(guān)鍵字搜索）。

在這些試驗中，31項應(yīng)用了源自干細胞的外泌體，主要是來自不同組織的間充質(zhì)干細胞，這些試驗被測試為間充質(zhì)干細胞療法的替代方案。這些臨床前和臨床研究表明，干細胞釋放的外泌體可能部分重現(xiàn)其供體細胞的治療效果，而沒有干細胞治療固有的缺點（表1）。

與干細胞不同，外泌體不能自我復制，從而消除了對干細胞移植后可能形成腫瘤的擔憂。外泌體也足夠穩(wěn)定，可以長期冷凍保存和凍干后室溫保存。它們的小尺寸進一步允許通過過濾進行滅菌。此外，外泌體可以通過多種途徑給藥；例如，霧化或凍干的肺干細胞來源的外泌體可以通過吸入給藥來治療肺部疾病。

此外，它們的親水腔和含有膜蛋白的磷脂雙層可以被設(shè)計和修飾以展示分子或用于藥物裝載；肺干細胞衍生的外泌體最近裝飾有重組 SARS-CoV-2的受體結(jié)合域，作為可吸入的COVID-19疫苗7。

2020年，Codiak Biosciences啟動了第一個工程化外泌體療法（exoSTING?）臨床試驗（ NCT04592484?），用于治療多種實體瘤，表明工程化外泌體可能是干細胞來源外泌體治療應(yīng)用的未來方向。

干細胞來源的外泌體的臨床轉(zhuǎn)化

干細胞和外泌體治療的市場前景看好。根據(jù)全球市場報告，全球干細胞市場預計到2030年將達到316億美元，全球外泌體市場預計到2030年將達到10.3億美元。美國國立衛(wèi)生研究院于2017年發(fā)布了美國國立衛(wèi)生研究院人類干細胞研究指南2009年，主要包括人類ES和iPS細胞的監(jiān)管標準和倫理問題。

此外，一些國際協(xié)會，包括國際干細胞研究學會和國際細胞外囊泡學會，已經(jīng)提出了解決干細胞和外泌體研究中存在分歧的問題的指南。這些指南為干細胞和外泌體研究提供了資源；然而，關(guān)于它們的臨床轉(zhuǎn)化和制造的全球共識仍然難以捉摸。值得注意的是，F(xiàn)DA不得不發(fā)布幾項關(guān)于干細胞和外泌體產(chǎn)品的公共安全通知。

因此，需要針對干細胞和外泌體治療制定全面的標準和法規(guī)。令人鼓舞的是，第一個干細胞相關(guān)國際標準（ISO 24603）于2022年8月發(fā)布，外泌體研究也可參考該標準，以標準化外泌體生產(chǎn)的上游步驟，用于外泌體治療。

干細胞和外泌體療法的臨床轉(zhuǎn)化有賴于在良好生產(chǎn)規(guī)范（GMP）設(shè)施中大規(guī)模制造干細胞和外泌體。HPC移植和嵌合抗原受體（CAR）-T細胞的發(fā)展促進了細胞治療產(chǎn)品的GMP設(shè)施的建立。然而，用于生成、分離和質(zhì)量控制外泌體的GMP設(shè)施仍然有限。用于實驗室規(guī)模分離外泌體的燒瓶式培養(yǎng)系統(tǒng)和超速離心法速度慢、費力，而且不適合大規(guī)模制造GMP級外泌體。另外，目前正在探索生物反應(yīng)器系統(tǒng)和中空纖維膜，分別用于細胞培養(yǎng)和過濾，以便大規(guī)模生產(chǎn)外泌體。

此外，需要徹底的質(zhì)量控制，以盡量減少外泌體的批次間差異。因此，需要能夠準確和可重復地表征外泌體的方法，包括濃度、顆粒大小、Zeta電位和外泌體標記物。ZetaView、Amnis、ImageStream和ONI Nanoimager等儀器能夠?qū)ν饷隗w的理化性質(zhì)進行表征，并可能取代傳統(tǒng)的方法，如納米粒子追蹤分析、動態(tài)光散射、蛋白質(zhì)印跡和流式細胞儀。外泌體質(zhì)量控制還應(yīng)該考慮外泌體的異質(zhì)性，它受到供體細胞狀態(tài)和分離方法的影響。

因此，需要有標準化的操作程序，這可以基于腺相關(guān)病毒的制造，這與外泌體的生產(chǎn)和純化類似。應(yīng)建立一個精簡的封閉式操作系統(tǒng)，將外泌體的大規(guī)模制造與可歸檔的質(zhì)量控制測試程序相結(jié)合。這樣一個數(shù)字化和自動化的系統(tǒng)可以通過減少人工操作和實施批次統(tǒng)一來進一步降低外泌體產(chǎn)品的成本。

參考資料：Zhang, K., Cheng, K. 干細胞衍生的外泌體與干細胞療法。 Nat Rev Bioeng (2023)。https://doi.org/10.1038/s44222-023-00064-2

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